A (teplota) 1. Pripravte kvapalné živné médiá MPB (mäsopeptónový bujón pre baktérie) a SB (Sabouraudov bujón pre kvasinky):

Transkript

1 PRÁCA Č. 6 NÁZOV PRÁCE: VPLYV VONKAJŠÍCH FAKTOROV NA RAST MIKROORGANIZMOV (1. časť) CIEĽ PRÁCE: Zistiť vplyv faktorov vonkajšieho prostredia: A) teplota, B) ph, C) UV žiarenie, D) kyslík POSTUP PRÁCE: A (teplota) 1. Pripravte kvapalné živné médiá MPB (mäsopeptónový bujón pre baktérie) a SB (Sabouraudov bujón pre kvasinky): Návažka na ml MPB: Návažka na ml SB: Živný bujón č g peptón pre bakteriológiu 10 g ph 7,2 7,4 glukóza 20 g ph 6,4 6,6 Nezabudnite upraviť ph oboch médií! 2. Médiá rozdávkujte po 5 ml do bakteriologických skúmaviek, uzavrite vatovými zátkami a sterilizujte v autokláve (120 kpa, 20 min). 3. Sadu skúmaviek označte (!) a naočkujte 50 µl inokula modelovej baktérie, resp. kvasinky (výsledná koncentrácia inokula je 1 %). baktérie: Serratia marcescens Bacillus stearothermophilus 4. Obsah opatrne premiešajte. 5. Inkubujte po jednej skúmavke pri rôznych teplotách kultivácie: 4 ºC (chladnička), 25 ºC (laboratórium), 37 ºC (termostat), 55 ºC (termostat) staticky do budúceho laboratórneho cvičenia. kvasinky: Saccharomyces cerevisiae Rhodotorula glutinis B (ph) 1. Pripravte kvapalné živné médiá MPB (mäsopeptónový bujón pre baktérie) a SB (Sabouraudov bujón pre kvasinky): Návažka na ml MPB: Návažka na ml SB: Živný bujón č g peptón pre bakteriológiu 20 g glukóza 40 g

2 2. Zmiešajte pripravené živné médiá s tlmivými roztokmi, resp. upravte ph s 30 % KOH tak, ako uvádza tabuľka: výsledné ph v skúmavke ph tlmivého roztoku objem tlmivého roztoku (ml) * objem živného média (ml) úprava ph s 30 % KOH áno * namiesto tlmivého roztoku sa použije destilovaná voda 3. Médiá rozdávkujte po 5 ml do vopred označených skúmaviek, uzavrite kovovými uzávermi a sterilizujte v autokláve (120 kpa, 20 min). 4. Sadu skúmaviek označte (!) a naočkujte 50 µl inokula modelovej baktérie, resp. kvasinky (výsledná koncentrácia inokula je 1 %). baktérie: Serratia marcescens Bacillus stearothermophilus Obsah opatrne premiešajte. kvasinky: Saccharomyces cerevisiae Rhodotorula glutinis 5. Skúmavky inkubujte staticky pri laboratórnej teplote do budúceho laboratórneho cvičenia. C (UV žiarenie) 1. Pripravte 100 ml MPA a 100 ml SlA, vysterilizujte ich v autokláve (120 kpa, 20 min) a nalejte 5 Petriho misiek. 2. Pripravte hustú suspenziu modelových mikroorganizmov (podľa pokynov vedúcich cvičenia) prenesením 3 bohatých očiek do 5 ml fyziologického roztoku: Bacillus subtilis a Staphylococcus aureus, resp. Escherichia coli a Serratia marcescens Rhodotorula glutinis a Saccharomyces cerevisiae 3. Na povrch živného média asepticky naneste 200 µl suspenzie mikroorganizmov a rozotrite sterilnou hokejkou po celom povrchu Petriho misky. 4. Petriho misky umiestnite priamo pod UV lampu (lampu zapnúť 5 min pred použitím, nahriata výbojka zabezpečí stálosť žiarenia) do vzdialenosti cca 30 cm. Snímte viečko Petriho misky a na povrch agarovej vrstvy položte masku. 5. Prvú sériu Petriho misiek exponujte 10 min, druhú 5 min, tretiu 1 min, štvrtú 0,5 min, ostatná séria zostane neexponovaná a bude slúžiť ako kontrola. 6. Zatvorené Petriho misky inkubujte pri laboratórnej teplote do budúceho laboratórneho cvičenia na svetle (režim deň-noc) a vyhodnoťte toxický účinok UV žiarenia. D (kyslík) 1. Pripravte 50 ml MPA do varnej banky a rozvarte ho v autokláve (120 kpa, 10 min). 2. Rozdávkujte po 10 ml do 4 bakteriologických skúmaviek s vatovými zátkami a vysterilizujte v autokláve (120 kpa, 20 min). 2

3 3. Nechajte stuhnúť vo zvislej polohe (tzv. vysoké agary). 4. Naočkujte hlbokým vpichom ihlou modelovými baktériami: Escherichia coli Bacillus subtilis 5. Inkubujte staticky pri laboratórnej teplote až do budúceho laboratórneho cvičenia. 3

4 PROTOKOL 6 NÁZOV PRÁCE: VPLYV VONKAJŠÍCH FAKTOROV NA RAST MIKROORGANIZMOV MENO: DÁTUM: SKUPINA: ÚLOHY 1. Vymenujte základné faktory vonkajšieho prostredia ovplyvňujúce rast. 2. Uveďte optimálne hodnoty teploty a ph pre väčšinu baktérií a húb (kvasiniek a mikromycét). 3. Doplňte tabuľku: A (650 nm) teplota kultivácie názov mikroorganizmu 4 ºC 25 ºC 37 ºC 55 ºC Ostatné podmienky kultivácie 4. Zostrojte analytické čiary závislosti A = f (t) pre baktérie a pre kvasinky(graf v exceli), na opis experimentálnych údajov použite vhodnú matematickú funkciu a pomocou prvej derivácie vypočítajte teplotné optimum pre každý mikroorganizmus (pozn.: graf priložiť ako prílohu na zvlášť papier). 5. Doplňte tabuľku: A (650 nm) ph kultivácie názov mikroorganizmu Ostatné podmienky kultivácie 6. Zostrojte analytické čiary závislosti A = f (ph) pre baktérie a pre kvasinky (graf v exceli), na opis experimentálnych údajov použite vhodnú matematickú funkciu a pomocou prvej derivácie vypočítajte teplotné optimum pre každý mikroorganizmus. (pozn.: graf priložiť ako prílohu na zvlášť papier) 4

5 7. Zakreslite a vyhodnoťte spôsob rastu modelových mikroorganizmov vo vysokom stĺpci agaru: názov mikroorganizmu nákres vzťah ku kyslíku podmienky kultivácie 8. Zaznačte intenzitu rastu modelových baktérií resp. kvasiniek v závislosti od času po ožiarení UV. (pozn porovnajte dvojice: grampozitívne a gramnegatívne, farebné a bezfarebné, baktérie a kvasinky. v diskusii.). Diskusia Porovnanie G+ a G - Porovnanie farebné a bezfarebné Porovnanie baktérie a kvasinky 5